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分享一下NEST細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)哪些問題
點擊次數(shù)：1660 更新時間：2020-09-21
NEST細(xì)胞培養(yǎng)對它不了解的朋友可能會覺得它很神秘，其實它的秘密很簡單，一個24孔板中一個大孔中包括1200個400um的倒置微孔，能將捕獲的單個iPS培養(yǎng)成類胚體，可以培養(yǎng)50至3000個一樣大小的細(xì)胞團(tuán)!當(dāng)你向培養(yǎng)板中加入細(xì)胞時，細(xì)胞會均勻的落入每個微孔孔中！它廣泛的應(yīng)用于iPS/ES培養(yǎng)成類胚體！
下面我就來給大家分享下NEST細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的問題：
一、細(xì)胞成長曲線測守時為什么要做重復(fù)孔?
答：測定細(xì)胞成長曲線細(xì)胞計數(shù)時挑選3個復(fù)孔，每孔分別計三次，取其平均值，目的是減小操作差錯。
二、為什么制作的細(xì)胞成長曲線沒有到達(dá)平臺期?
答：可能有以下原因：一是細(xì)胞接種密度過低;二是細(xì)胞培育時刻過短;三是細(xì)胞成長狀況欠好，使其不能正常增殖。
三、怎么挑選細(xì)胞接種數(shù)?
答：可根據(jù)細(xì)胞傳代培育過程中接種數(shù)及細(xì)胞成長周期進(jìn)行核算，細(xì)胞接種數(shù)因細(xì)胞的不同而不同。
四、細(xì)胞計數(shù)時為什么要用臺盼藍(lán)染色?
答：參加臺盼藍(lán)后，活細(xì)胞不上色，臺盼藍(lán)上色的細(xì)胞呈深藍(lán)色，是不健康或已死亡的細(xì)胞，不能計數(shù)。
五、測定細(xì)胞成長曲線的含義是什么?
答：細(xì)胞成長曲線是測定細(xì)胞肯定成長數(shù)的常用辦法，也是斷定細(xì)胞生機(jī)的重要目標(biāo)，是培育細(xì)胞生物學(xué)特性的基本參數(shù)。由于細(xì)胞太小，無法測單個細(xì)胞的成長狀況，所以測細(xì)胞集體的成長曲線。
六、細(xì)胞成長曲線測定周期是幾天?
答：一般是一個星期。
七、細(xì)胞成長曲線還有其他辦法制作嗎?
答：當(dāng)然有。我們說到較多的是直接計數(shù)的辦法，除此以外還有相對計數(shù)的辦法，該類辦法首先要制作規(guī)范曲線，標(biāo)定細(xì)胞數(shù)和某個變量的函數(shù)，然后我們只需要測定每天這個變量的值便能夠核算出細(xì)胞數(shù)。常用的是MTT、CCK8等比色的辦法。
八、為什么細(xì)胞計數(shù)多天，細(xì)胞數(shù)沒有添加反而削減?
答：一般細(xì)胞傳代后，會有一個成長緩慢的潛伏期，細(xì)胞不增殖，而細(xì)胞會有正常的死亡，故細(xì)胞數(shù)不添加反而削減。
